细胞计数仪实操干货：样本制备、校准步骤与常见故障排除，新手也能上手

日期：2025-10-21浏览：14次

　　细胞计数是生物医学研究和临床诊断中的重要环节，而细胞计数仪的出现极大地简化了这一过程。然而，对于新手来说，如何正确操作细胞计数仪、制备合适的样本以及解决常见问题，仍然是一个挑战。本文将详细介绍它的实操技巧，包括样本制备、校准步骤以及常见故障排除，帮助新手快速上手并掌握这门技术。

　　一、样本制备

　　（一）细胞收集

　　样本制备是细胞计数的第一步，而细胞收集则是关键环节。对于贴壁细胞，通常需要使用胰蛋白酶进行消化，使其从培养皿表面脱落。在消化过程中，要密切观察细胞的形态变化，避免过度消化导致细胞损伤。当细胞开始脱落时，轻轻敲击培养皿，使细胞脱落，然后加入适量的培养基终止消化。对于悬浮细胞，可以直接收集培养液中的细胞，但要注意避免杂质的混入。

　　（二）细胞悬浮

　　收集到的细胞需要制备成均匀的细胞悬浮液，以便进行准确计数。将收集到的细胞转移到离心管中，以适当的速度离心（通常为 1000 - 1500rpm，3 - 5 分钟），去除上清液后，用适量的生理盐水或培养基轻轻重悬细胞。在重悬过程中，要避免产生气泡，以免影响细胞计数的准确性。如果细胞浓度过高，可以适当稀释；如果浓度过低，则需要重新收集细胞。

　　（三）细胞染色

　　为了更准确地计数活细胞和死细胞，通常需要对细胞进行染色。常用的染色方法有台盼蓝染色法和荧光染色法。台盼蓝染色法是基于细胞膜的完整性，活细胞排斥台盼蓝，而死细胞会吸收染料呈现蓝色。在染色时，将细胞悬浮液与台盼蓝染液按一定比例混合（通常为 1:1），轻轻混匀后即可进行计数。荧光染色法则需要使用荧光显微镜进行观察，通过荧光染料标记细胞的特定成分，区分活细胞和死细胞。

　　二、校准步骤

　　（一）开机预热

　　在使用细胞计数仪之前，需要先进行开机预热。预热时间一般为 15 - 30 分钟，具体时间可以根据仪器的说明书进行调整。预热的目的是让仪器的光学系统和电子元件达到稳定状态，从而提高计数的准确性。

　　（二）校准液准备

　　校准液是用于校准细胞仪的标准溶液，通常由仪器制造商提供。校准液中含有已知浓度的标准微粒，这些微粒的大小和形状与细胞相似，可以模拟细胞的光学特性。在进行校准之前，要确保校准液保存良好，无沉淀、浑浊或变质现象。

　　（三）校准操作

　　将校准液按照说明书的要求加入计数池中，然后启动仪器的校准程序。仪器会自动检测校准液中的微粒浓度，并与预设的标准值进行比较。如果检测值与标准值一致，说明仪器处于良好的工作状态；如果检测值与标准值存在偏差，仪器会提示需要进行校准调整。根据仪器的提示，进行相应的校准操作，直到检测值与标准值一致为止。

　　三、常见故障排除

　　（一）计数不准确

　　计数不准确是细胞计数仪常见的问题之一，可能由多种原因引起。首先，要检查样本制备是否符合要求，细胞悬浮液是否均匀、是否存在气泡或杂质。如果样本制备不当，需要重新制备样本。其次，要检查仪器的校准状态，确保仪器已经正确校准。如果仪器未校准或校准液过期，需要重新进行校准。此外，要检查计数池是否清洁，是否有残留的细胞或杂质。如果计数池不清洁，会影响计数的准确性，需要使用专用的清洁液进行清洗。

　　（二）仪器无法启动

　　如果细胞仪无法启动，首先要检查电源连接是否正常，确保仪器已经正确连接到电源插座上。如果电源连接正常，但仪器仍然无法启动，可能是仪器内部的保险丝熔断或电源模块故障。在这种情况下，需要联系仪器制造商的技术支持人员进行维修。

　　（三）数据传输问题

　　在使用细胞计数仪时，数据传输是常见的问题之一。如果仪器无法将数据传输到电脑或其他设备上，首先要检查数据传输线是否连接正确，确保传输线没有损坏或松动。如果传输线连接正常，但数据仍然无法传输，可能是仪器的软件设置问题。检查仪器的软件设置，确保数据传输格式和参数与接收设备一致。如果问题仍然存在，可以尝试重新安装仪器的驱动程序或更新软件版本。

　　四、总结

　　细胞计数仪是一种高效、准确的细胞计数工具，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。通过正确的样本制备、校准步骤和常见故障排除，新手也可以快速上手并掌握这门技术。在样本制备过程中，要注意细胞收集、悬浮和染色的细节，确保样本的质量；在校准过程中，要严格按照说明书的要求进行操作，确保仪器的准确性；在使用过程中，要及时发现并解决常见故障，保障仪器的正常运行。希望本文的实操干货能够帮助新手更好地使用细胞仪，提高工作效率和实验结果的可靠性。